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DNA殘留檢測試劑盒

簡要描述:對所使用的疫苗,我們Z關(guān)心的是疫苗的效果和其安全性。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時間:2024-08-29
  • 訪  問  量:3064

詳細介紹

疫苗DNA殘留對人體的潛在危害

對所使用的疫苗,我們zui關(guān)心的是疫苗的效果和其安全性。現(xiàn)在很多疫苗是細胞培養(yǎng)疫苗,比如重組(CHO細胞)乙肝疫苗,Vero細胞狂犬病疫苗等大多數(shù)疫苗都是用細胞培養(yǎng)的方法生產(chǎn),而對疫苗的純化是關(guān)鍵問題,我們要盡可能的去除宿主細胞DNA和宿主蛋白。假若宿主細胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人體將會產(chǎn)生不可預(yù)料的后果。就以疫苗DNA殘留為例,疫苗DNA殘留可能造成插入突變﹑導(dǎo)致抑癌基因失活﹑癌基因被激活等,zui終造成疫苗使用者致癌。

 

疫苗DNA殘留的相關(guān)法規(guī)

由于有如此潛在的危險性,所以許多機構(gòu)對疫苗DNA殘留制定了相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),1986年世界衛(wèi)生組織規(guī)定用細胞系生產(chǎn)的疫苗DNA殘留不能超過100 pg /支 ,而在1998年世界衛(wèi)生組織認為細胞系生產(chǎn)的疫苗DNA殘留不能超過10 ng /支,而在1997年美國藥品食品衛(wèi)生監(jiān)督局規(guī)定在美國使用的細胞系疫苗DNA殘留不能超過10 pg /支,中國規(guī)定的細胞系疫苗DNA殘留不能超過100 pg /支。

所以在疫苗生產(chǎn)中要隨時對DNA殘留進行檢測,以便知道每個過程除掉DNA殘留的能力。在每一批產(chǎn)品中我們必須檢測DNA殘留,所以我們必須運用敏感且行之有效的對DNA殘留定量的檢測方法。通常規(guī)定每支疫苗DNA殘留不能超過100 pg,也就大約等同于17個甚至更少CHO細胞基因組DNA的含量,對如此微量的DNA殘留進行檢測,所用的技術(shù)方法就必須相當(dāng)敏感和穩(wěn)定,現(xiàn)在對DNA殘留定量的方法主要有以下三種:
1、分子雜交技術(shù)檢測DNA殘留
2、基于DNA結(jié)合蛋白的方法(Threshold® immunoassay)檢測DNA殘留
3、實時定量PCR法檢測DNA殘留

 

分子雜交技術(shù)檢測DNA殘留的原理和方法

分子雜交分析的基本原理是基于DNA探針檢測變性而且固定在硝-酸纖維素膜上的宿主細胞DNA。這些探針可以不依賴宿主細胞DNA來制備,例如用隨機引物制備探針。探針上標(biāo)記酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛(Dig)等。由于地高辛標(biāo)記核酸探針,操作方便、靈敏度高,已標(biāo)記的探針在4℃貯存可達兩年之久,方便隨時應(yīng)用,所以現(xiàn)在常采用地高辛標(biāo)記核酸探針,用光標(biāo)記法將光敏Dig標(biāo)記到探針上,制成光敏-Dig-核酸探針,再與固定在硝--酸膜上的靶核酸進行靶DNA分子雜交,使之與抗Dig-堿性磷酸酶結(jié)合,zui后可用不同的檢測方式進行檢測,發(fā)光檢測和顯色檢測均可,靈敏度可達10pg以下(表 1  三種DNA殘留檢測方法的比較)。

 

基于DNA結(jié)合蛋白的方法(Threshold® Immunoassay)檢測DNA殘留的原理和方法

Threshold® Immunoassay分析系統(tǒng)是基于兩種DNA序列非特異性蛋白,單鏈DNA(ssDNA)結(jié)合蛋白(SSB)和抗ssDNA 的單抗。檢測的基本過程是當(dāng)生物素—DNA單鏈結(jié)合蛋白和尿素酶—抗ssDNA 的單抗與變性的宿主細胞DNA結(jié)合zui終形成復(fù)合物,通過親合素將此復(fù)合物連接到生物素—硝--酸纖維素膜,在通過洗滌所有非特異性的被洗脫掉,zui后放于有尿素溶液的讀數(shù)儀,尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2 導(dǎo)致PH值發(fā)生變化,讀數(shù)儀根據(jù)PH值的變化換算成DNA的量,從而達到檢測DNA殘留含量的目的。

 

實時定量PCR法檢測DNA殘留的原理和方法

熒光定量PCR是基于PCR擴增時,在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,產(chǎn)物的增加可以通過熒光信號指示,通過實時監(jiān)控PCR體系中的熒光信號,對樣本中初始模板進行定量分析。定量PCR可實時檢測產(chǎn)物量,通過加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后根據(jù)待測樣品在標(biāo)準(zhǔn)曲線中的位置推算初始模板的濃度,從而達到檢測DNA殘留含量的目的。

 

三種檢測DNA殘留方法的比較

3種方法用來檢測疫苗DNA殘留都要對樣品進行相應(yīng)的處理,這對zui終的結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。而雜交相對對樣品DNA的損失小,而用Q-PCR需要提取樣品的DNA,損失較大。在我們選擇那種方法時我們要考慮它的穩(wěn)定性,敏感性,成本等以至找到*的性價比的方法(表 1),從表1 我們不難發(fā)現(xiàn)使用分子雜交的方法是一種比較可行經(jīng)濟實用的方法,目前國內(nèi)也主要是用此方法。

表 1  三種DNA殘留檢測方法的比較

 

Hybridization

Threshold® Immunoassay

Q-PCR

特異性

物種特異性

無特異性

序列特異性

檢測的zui小序列長度(bp)

50

600

150

抗干擾性和穩(wěn)定性

++

+

+

所需時間(h)

48

6

2

敏感性(pg)

10

6

<1

初期花費($)

1200

>40000

>70000

 

羅氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II試劑盒產(chǎn)品簡介

產(chǎn)品中文名稱:高效DNA地高辛標(biāo)記和檢測試劑盒II

羅氏應(yīng)用科學(xué)部(Roche Applied Science)是zui早致力于向用戶提供非放射標(biāo)記技術(shù)的公司之一,讓更多的科研工作者們可以避免使用危險的放射性同位素。DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II(第二代)是由羅氏公司研發(fā),并且是在DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I(*代)的基礎(chǔ)上優(yōu)化升級的,具有更高的準(zhǔn)確性、更好的靈敏度、操作時間更短等特點。自1995年地高辛產(chǎn)品上市以來,盡管有定量PCR技術(shù)的應(yīng)用,DIG系統(tǒng)仍然是非放射性高效標(biāo)記—檢測技術(shù)的*,被廣泛地應(yīng)用各種膜雜交及原位雜交技術(shù)中。

 

高效DNA地高辛標(biāo)記和檢測試劑盒II 圖片

 

欲了解詳細信息請咨詢 

 

羅氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II檢測原理

該產(chǎn)品是用地高辛(地高辛:英文名Digoxigenin,簡稱DIG;又稱異羥基洋地黃毒甙元,是一種類固醇半抗原分子)標(biāo)記的DNA探針,應(yīng)用于分子雜交和隨后的化學(xué)發(fā)光檢測。檢測主要分三階段進行:1. DNA標(biāo)記:根據(jù)隨機引物標(biāo)記技術(shù),生成DIG地高辛標(biāo)記的DNA探針。 2. 雜交:按照標(biāo)準(zhǔn)雜交方法進行,將地高辛標(biāo)記的DNA探針用于核酸點雜交,可選擇帶正電的尼龍膜或純硝--酸纖維素膜作為雜交膜。 3. 免疫學(xué)檢測:首先將標(biāo)記有AP的地高辛抗體與雜交探針免疫結(jié)合;然后在477 nm波長下,通過檢測堿性磷酸酶與CSPD底物產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的數(shù)值,從而達到免疫檢測的目的。

 

羅氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II的顯著特點

★ Accurate and fast-----使用預(yù)混合的高效地高辛(DIG)標(biāo)記的隨機引物可以縮短標(biāo)記DNA探針的操作時間,提高標(biāo)記物的產(chǎn)量。
★ Sensitive-----在人類DNA的復(fù)合物和植物基因組中,可以檢測到單個拷貝的基因。
★ Time-saving-----地高辛(DIG)標(biāo)記的探針可以儲存一年以上,雜交液可以反復(fù)使用3~5次(具體要根據(jù)每次雜交過程中標(biāo)記探針產(chǎn)生信號的強弱來確定)。

 

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例如: Vero Cell HCP ELISA Kit
           CHO HCP ELISA Kit, 3G
           Pichia pastoris HCP ELISA Kit 
           E.coli HCP ELISA Kit
           Human Erythropoietin(EPO) Quantikine IVD ELISA Kit 

           更多相關(guān)產(chǎn)品請點擊查看>>> Cygnus Biotech ELISA Kits


 

           尼龍膜
           PVDF膜
           硝--酸纖維素膜
           魚精DNA
           蛋白酶K

 

11745832910

Product Quantity  Cat. No.
Qubit® 2.0 Fluorometer Each Q32866
Qubit® Quantitation Starter Kit Each Q32871
Qubit® Quantitation Lab Starter Kit Each Q32872
Qubit® dsDNA BR Assay Kit 100 assays, 2–1000 ng
500 assays, 2–1000 ng
Q32850
Q32853
Qubit® dsDNA HS Assay Kit 100 assays, 0.2–100 ng
500 assays, 0.2–100 ng
Q32851
Q32854
Qubit® ssDNA Assay Kit 100 assays, 1–200 ng Q10212
Qubit® RNA Assay Kit 100 assays, 5–100 ng
500 assays, 5–100 ng
Q32852
Q32855
Qubit® RNA BR Assay Kit 100 assays, 20–1000 ng
500 assays, 20–1000 ng
Q10210
Q10211
Qubit® Protein Assay Kit 100 assays, 0.25–5 μg
500 assays, 0.25–5 μg
Q33211
Q33212
Qubit® Assay Tubes Set of 500 Q32856

 

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