實(shí)驗(yàn)原理
血紅蛋白具有類過氧化物酶活性,可催化H2O2釋放新生態(tài)氧,使鄰甲聯(lián)苯胺氧化發(fā)生顏色變化,由無色zui終變?yōu)樗{(lán)紫色。根據(jù)顯色深淺與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較,可測(cè)出其含量。
實(shí)驗(yàn)方法
材料:
1.2g/L鄰甲聯(lián)苯胺溶液
2.1%H2O2
3.10%醋酸溶液
4.分光光度計(jì)
方法:
1.抽取靜脈血2-3ml,枸櫞酸鈉抗凝,離心分離血漿。
2.按下表進(jìn)行操作,用分光光度計(jì),波長(zhǎng)為530nm,以空白管調(diào)零,測(cè)定測(cè)定管的吸光度。
試劑 (ml) | 測(cè)定管 | 空白管 |
2 g/L鄰甲聯(lián)苯胺溶液 | 0.5 | 0.5 |
患者血漿 | 0.02 | / |
1% H2O2 | 0.5 | 0.5 |
混勻后室溫放置10min | ||
10%醋酸溶液 | 5.0 | 5.0 |
室溫放置10min |
3.計(jì)算公式
血漿游離Hb(mg/L)=測(cè)定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度×100
實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
參考范圍:0-40mg/L
注意事項(xiàng)
1.一切容器避免血紅蛋白污染;
2.采血要順利,器皿要干燥,檢測(cè)血漿要新鮮,及時(shí)分離,防止人為溶血;
3.鄰聯(lián)苯胺溶液具致癌性,檢測(cè)時(shí)要小心,廢液要妥善處理,以免污染;
4.雙氧水要新鮮配置,濃度要準(zhǔn)確。
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