1包被緩沖液,
(1)碳酸鹽緩沖液(PH9.6 +0.2 0.05M) 《激素酶免疫測(cè)定技術(shù)》石老師編著
Na2CO31.59g
NaHCO3 2.93g
加蒸餾水至1000ml。
(2)tris緩沖液(0.05mol/L)50ml 0.1mol/L
(Tris)溶液與x ml 0.1mol/L 鹽酸混勻后,加水稀釋至100ml 《酶免疫測(cè)定技術(shù)》楊立國(guó)等編著
各種pH值的Tris緩沖液的配制 | |
所需pH值(25℃) | 0.1mol/L HCl的體積 |
7.1 | 45.7 |
7.2 | 44.7 |
7.3 | 43.4 |
7.4 | 42.0 |
7.5 | 40.3 |
7.6 | 38.5 |
7.7 | 36.6 |
7.8 | 34.5 |
7.9 | 32.0 |
8.0 | 29.2 |
8. 1 | 26.2 |
8.2 | 22.9 |
8.3 | 19.9 |
8.4 | 17.2 |
8.5 | 14.7 |
8.6 | 12.4 |
8.7 | 10.3 |
8.8 | 8.5 |
8.9 | 7.0 |
某一特定pH值的0.05mol/L Tris緩沖液的配制:將50ml 0.1mol/L Tris堿溶液與上表所示相應(yīng)體積(單位:ml)的0.1ml/L HCl混合,加水將體積調(diào)至100ml
0.1mol/L鹽酸的配置: 買來的濃鹽酸是 12 mol/L的,以配制1L 0.1mol/L的鹽酸為例: 先用量筒量取8.3 mL的濃鹽酸倒入容量瓶,然后將溶液加蒸餾水稀釋至體積為1 L,此時(shí)的溶液就是0.1mol/L的鹽酸。
0.1mol/Ltris的配置:0.1 mol/L溶液為12.114 g/L 則 配制600mlTris緩沖液的方法: 三羥甲基氨基甲烷: 3.6g 濃鹽酸: 2.09ml
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3)0.02mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.4)
磷酸二氫鉀 0.2g
磷酸氫二鈉 2.90g
氯化鈉 8g
加去離子水定容到1000ml。
2洗滌緩沖液(pH7.4 0.15mol/L) 《激素酶免疫測(cè)定技術(shù)》石老師編著
0.05%Tween-20 0.5ml
加在PBS緩沖液1000ml中。
PBS緩沖液:
KH2PO4 0.2g
Na2HPO4·12H2O 2.9g
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
加蒸餾水至1000ml。
3測(cè)定緩沖液(Ph7.0 含0.87﹪NaCl 和0.1﹪BSA的0.1M磷酸緩沖液)用于標(biāo)準(zhǔn)孕酮,孕酮酶標(biāo)物及奶樣的稀釋。 《激素酶免疫測(cè)定技術(shù)》石老師編著
Na2HPO4·12H2O 21.85g
NaH2PO4·2H2O 6.08g
NaCl 8.70g
BSA 1.00g
溶于1000mL蒸餾水中
4封閉緩沖液
牛血清白蛋白(BSA) 2% 2g
?。ɑ?%脫脂奶粉)加洗滌緩沖液100 ml。
0.05mol/L碳酸鹽緩沖液(pH9.6)+2.0%BSA
2.0gBSA加配好的0.05mol/L碳酸鹽緩沖液溶解定量至100ml
5底物緩沖液(pH5.4)磷酸鹽-檸檬酸緩沖液
0.2M Na2HPO4(無水28.4g/L,帶12結(jié)晶水71.7g/L) 取25.7ml
0.1M 檸檬酸(無水19.2g/L,帶1結(jié)晶水21.01g/L) 取24.3ml
加蒸餾水至100ml。
或
檸檬酸(C6H8O7·H2O) 0.47g
Na2HPO4·12H2O 2.00g
6(1) TMB(四甲基聯(lián)苯胺)顯色液(藍(lán)色)
A液(3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺,TMB):稱取TMB20mg溶于10ml無水乙醇中,*溶解后,加雙蒸水至100ml。
B液(0.1mol/L檸檬酸-0.2mol/L磷酸氫二鈉緩沖液,pH5.0-5.4):稱取Na2HPO4·12H2O14.34g,檸檬酸1.87g溶于180ml雙蒸水,加0.75%過氧化氫尿素1.28ml,定容至200ml,調(diào)pH至5.0-5.4。
將A液和B液按1:l混合后即成TMB-過氧化氫尿素應(yīng)用液
或
TMB(2mg/ml水) 0.05ml
底物緩沖液 0.95ml
30% H2O2 0.001ml
總體積1ml。
(2)OPD(鄰苯二胺)顯色液(黃棕色)(現(xiàn)配避光)
OPD(干粉) 0.004g
底物緩沖液 10ml
30% H2O2 0.015ml
總體積10ml。
(3)TMBS底物液(用于顯色) 《激素酶免疫測(cè)定技術(shù)》石老師編著
10mg四甲基聯(lián)苯胺硫酸鹽(TMBS)的二甲基亞砜溶液,用底物緩沖液配成0.2mg/ml的TMBS底物液。用前加H2O2溶液30﹪左右。
7 終止液 2mol/LH2SO4 用于終止反應(yīng)
在178.3ml水中,逐滴加入濃硫酸(18M,約98%)21.7ml,邊加邊搖。(濃H2SO4:蒸餾水=1:9)
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