trilinkbiotech N-6001系列產(chǎn)品-上海起發(fā)現(xiàn)貨

Guanosine-3',5'-bisdiphosphate - (N-6001)

ppGpp, Magic Spot, Guanosine tetraphosphate

鳥苷3'，5'-雙二磷酸-（N-6001）

ppGpp，魔點(diǎn)，鳥苷四磷酸

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描述

）特別地，ppGpp強(qiáng)烈抑制翻譯機(jī)制的成分如tRNA和rRNA的合成（Paul，BJ，et al。，Gralla，JD，et al。），同時(shí)刺激氨基酸生物合成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄（ Artimovitch，I.等）。這種ppGpp介導(dǎo)的機(jī)制可防止不必要的能源外流，以幫助細(xì)菌生存直至達(dá)到足夠的氨基酸水平。ppGpp鳥苷四磷酸的合成是在嚴(yán)格的響應(yīng)機(jī)制下由ATP和GDP合成的（圖1）。RelA和SpoT蛋白在維持適當(dāng)?shù)膒pGpp水平中起著關(guān)鍵作用（綜述于（Potrykus，K.，et al。））。合成后，ppGpp轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合酶結(jié)合（Vrentas，CE等，）調(diào)節(jié)某些啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄，該過(guò)程在大腸桿菌中受蛋白質(zhì)DksA輔助，圖2（Paul，BJ等）。在存在ppGpp的情況下，tRNA和rRNA的合成會(huì)減少，有利于氨基酸生物合成基因的轉(zhuǎn)錄。盡管人們了解了ppGpp的作用，但尚未*闡明ppGpp參與某些啟動(dòng)子調(diào)控的機(jī)制，并且在不同細(xì)菌之間存在差異（Bernardo，LM等）。ppGpp的分子機(jī)制仍在研究中，以更好地發(fā)揮作用。通過(guò)嚴(yán)格的響應(yīng)了解不同細(xì)菌如何適應(yīng)環(huán)境。嚴(yán)格的響應(yīng)盡管ppGpp在體內(nèi)細(xì)胞存活中起著至關(guān)重要的作用，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，有幾個(gè)小組對(duì)我們目前有關(guān)四磷酸鳥苷如何與RNA聚合酶和其他轉(zhuǎn)錄因子相互作用的知識(shí)做出了貢獻(xiàn)（Lemke，JJ，Vrentas，CE，Powell，BS，deLivron，MA等）。著名的是，威斯康星大學(xué)的理查德·古斯（Richard Gourse）的實(shí)驗(yàn)室致力于了解RNA轉(zhuǎn)錄調(diào)控以及ppGpp在調(diào)節(jié)對(duì)變化的環(huán)境條件的響應(yīng)中所起的作用。Paul et al。（2003）描述了一種很好表征的轉(zhuǎn)錄測(cè)定法，以檢查添加的ppGpp濃度對(duì)體外轉(zhuǎn)錄過(guò)程中啟動(dòng)子活性的影響。在本文中，我們提供了一些通用指導(dǎo)原則，可以在其中改變ppGpp數(shù)量以評(píng)估其對(duì)細(xì)胞嚴(yán)格反應(yīng)的影響的任何體外轉(zhuǎn)錄測(cè)定中遵循。* Potrykus和Cashel指出，從大腸桿菌提取物中的放射自顯影照片中出現(xiàn)了兩個(gè)斑點(diǎn)，這些斑點(diǎn)與氨基酸饑餓的壓力有關(guān)。俄亥俄州立大學(xué)的伊琳娜·阿蒂西莫維奇（Irina Artsimovitch）稱，這些斑點(diǎn)被標(biāo)記為“魔術(shù)”，因?yàn)?ldquo;微生物學(xué)家半個(gè)世紀(jì)以來(lái)一直在想，這種結(jié)構(gòu)相對(duì)簡(jiǎn)單的小分子如何對(duì)調(diào)節(jié)細(xì)胞的存活產(chǎn)生如此深遠(yuǎn)的影響。” 使用ppGpp進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄測(cè)定的基本實(shí)驗(yàn)參數(shù)：該測(cè)定法是研究ppGpp的細(xì)胞代謝方面的基本工具，這些方面對(duì)養(yǎng)分利用率的變化非常敏感，Schneider等人介紹了Gourse博士的基本方法之一。涉及制備將適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)緩沖液，DNA模板（超螺旋質(zhì)粒或線性）結(jié)合的反應(yīng)混合物，NTP的不平衡池（UTP的濃度非常低），以及存在或不存在ppGpp時(shí)感興趣的RNA聚合酶。然后將轉(zhuǎn)錄反應(yīng)在適當(dāng)?shù)臏囟群瓦m當(dāng)?shù)臏囟认路跤?，使用EDTA和甲酰胺溶液淬滅，然后通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行分析，以確定轉(zhuǎn)錄產(chǎn)量。在Krásný和Gourse，Vrentras等人，Paul等人，Carmona等人和Bernardo等人中也描述了此協(xié)議的其他顯著變化。注意：應(yīng)包括含有緩沖液而不是ppGpp的對(duì)照反應(yīng)。注意：必須為每個(gè)特定的啟動(dòng)子優(yōu)化鹽濃度（KCl或NaCl）。在高鹽濃度下，ppGpp的作用更為明顯（Potrykus，K.等）。” 我與之打交道的人一直都是專業(yè)人士，并且對(duì)產(chǎn)品有很好的工作知識(shí)。您提供的產(chǎn)品無(wú)法通過(guò)其他任何來(lái)源（ppGpp）獲得。我有一個(gè)小型實(shí)驗(yàn)室，即使我們可以自己制作化合物，也不必專門找人制作化合物來(lái)加快我的研究工作。我認(rèn)為你很棒---真的!!!“維多利亞·羅賓遜康涅狄格大學(xué)副教授

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