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bellbrooklabs Transcreener® HTS Assays

更新時間:2020-04-23      點擊次數(shù):1862

 

 

bellbrooklabs Transcreener® HTS Assays

使用核苷酸的直接檢測和均一的熒光讀數(shù)對酶進行通用的高通量篩選測定。

TRANSCREENER ADP 2分析

激酶測定

ATP酶測定

TRANSCREENER AMP 2 / GMP 2分析

磷酸二酯酶測定

連接酶和合成酶檢測

糖基轉移酶測定

甲基轉移酶測定

交易者GDP檢測

GTPase檢測

GAP檢測

GEF分析

糖基轉移酶測定

TRANSCREENER UDP 2分析

糖基轉移酶測定

傳送者 CGAMP檢測

cGAS分析

TRANSCREENER ADO CD73分析

CD73檢測

成千上萬個目標的分析。

  • Transcreener檢測依賴于核苷酸的直接免疫檢測,與復雜的酶聯(lián)檢測方案相比,它不易受到干擾的影響。
  • 四種類型的Transcreener核苷酸檢測測定法使您可以更快,更高效地篩查數(shù)千種目標酶。
  • 您可以選擇FP,F(xiàn)I和TR-FRET讀數(shù);所有產(chǎn)品均帶有深紅色熒光,并在主要的多模式閱讀器上具有經(jīng)過認證的性能。
  • 均質,混合和讀取格式可用于終點分析或連續(xù)監(jiān)測酶活性。
  • 過夜的試劑和信號穩(wěn)定性意味著可以在大型自動化屏幕中獲得可靠,可靠的篩選數(shù)據(jù)。

Transcreener:工作原理

Transcreener是一種通用的測定方法,可用于整個核苷酸依賴性酶家族。無需對大量特定的反應產(chǎn)物(例如磷酸化的蛋白質或脂質)使用單獨的測定法,而是可以將單核苷酸檢測測定法用于產(chǎn)生共同核苷酸產(chǎn)物的所有酶。例如,ADP檢測可用作任何蛋白質,脂質或碳水化合物激酶的通用激酶測定方法。

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Transcreener分析法依靠使用能夠基于單個磷酸基團區(qū)分核苷酸的抗體直接,高度特異性地檢測核苷酸。產(chǎn)物核苷酸相對于底物的選擇性(例如,激酶測定的ADP相對于ATP的選擇性)為150倍至1000倍以上。這種*的選擇性允許在底物核苷酸過量的情況下檢測核苷酸酶產(chǎn)物(例如,在激酶測定中存在過量ATP的情況下進行ADP檢測),這是測量酶初始速度的必要條件。

為了產(chǎn)生信號,Transcreener分析使用均質的競爭性免疫分析形式,其中抗體與高親和力熒光示蹤劑配對。示蹤劑被檢測到的核苷酸置換會導致其熒光性質發(fā)生變化。FP分析是簡單的方法。它只需要示蹤劑和未修飾的抗體;極化的變化是由示蹤劑移動時增加的旋轉遷移率引起的。對于TR-FRET和FI格式,抗體與分子結合,該分子在結合時會改變示蹤熒光的強度,而在置換示蹤劑時會失去這種效果。

Transcreener:為什么直接檢測對HTS更好

與任何其他核苷酸檢測分析法相比,轉導分子測定法試劑更少,機制也更簡單,后者通常需要偶聯(lián)酶才能將核苷酸轉化為可以通過報告酶產(chǎn)生信號的產(chǎn)物。每種偶聯(lián)和報告酶都是被篩選化合物的潛在靶標,這會增加假陽性或缺失命中的風險,并需要額外的孔來進行反篩選。(某些ADP檢測方法甚至使用激酶作為偶聯(lián)酶,這進一步使它們在激酶抑制劑篩選中的使用變得復雜。)

混合閱讀簡單

直接檢測還意味著該方案是簡單,靈活的方案:運行您的酶反應,在停止混合的情況下添加Transcreener試劑,并讀取板?;蛘呖梢栽诿阜磻_始時添加Transcreener檢測試劑,以連續(xù)監(jiān)測酶活性。例如,通過“跳躍稀釋”激酶測定法測量抑制劑的停留時間。一些耦合方法需要額外的液體添加和溫育步驟,這會使化驗自動化變得復雜,并使其無法以連續(xù)模式運行。

用生化分析方法測量藥物靶標停留時間的指南

用生化分析方法測量藥物靶標停留時間的指南

 

出色的試劑穩(wěn)定性-簡化篩選

所有Transcreener抗體和示蹤劑以及測定信號在室溫下至少穩(wěn)定8小時。這樣可確保即使在大型的自動屏幕中,數(shù)據(jù)質量也不會受到影響,因為在這種情況下,檢測混合物可能會在室溫下長時間存放在分配臺中。由于偶聯(lián)酶的不穩(wěn)定性,其他核苷酸檢測測定法具有更嚴格的解凍后儲存要求。此外,與某些耦合酶測定法產(chǎn)生的瞬態(tài)信號不同,Transcreener熒光信號至少會持續(xù)一整夜-持續(xù)數(shù)天-因此,在添加檢測試劑后很長時間即可讀取板。出色的試劑和信號穩(wěn)定性使Transcreener分析非??煽浚子谠谧詣踊疕TS環(huán)境中使用。

Transcreener:您可以用它做什么

成千上萬的細胞反應使用核苷酸,包括大多數(shù)催化蛋白質翻譯后修飾(例如磷酸化和甲基化)的酶。由于它們在信號轉導中的核心作用,許多PTM酶已成為藥物靶標。盡管蛋白激酶受到廣泛的關注,但是乙?;D移酶,甲基轉移酶和糖基轉移酶也是經(jīng)過臨床驗證的靶標,并且還有更多與PTM相關的藥物正在研發(fā)中。開發(fā)了Transcreener檢測試劑盒,以使HTS能夠靶向PTM酶以及其他類型的核苷酸依賴性酶,包括ATPase,GTPases和磷酸二酯酶。

Transcreener Assays已開發(fā)并不斷改進,可用于工業(yè)HTS環(huán)境。自2006年推出以來,它們已在使用的所有主要多模式讀板器中,在96,384或1536孔板上的超過6,000萬孔抑制劑篩選,分析和機理研究中使用。在激酶測定中使用ADP檢測占了這些孔的一半以上,這些用戶中的大多數(shù)在將Transcreener與其他測定方法進行比較后決定使用Transcreener。對于許多非典型目標-糖基轉移酶,解旋酶,羧化酶,GTP酶,連接酶,僅舉幾例-沒有很好的選擇,并且Transcreener確實是一項真正的使能技術。沒有它,屏幕可能不會前進。

無論目標是什么,在底物轉化率的整個范圍內(nèi),底物轉化率均小于10%(通常低得多)時,所有Transcreener分析均會產(chǎn)生大于0.7的Z'值。它們在很大程度上不受酶測定中使用的大多數(shù)試劑的影響,并且信號至少在一夜之間是堅如磐石的。我們已經(jīng)與主要的多模式儀器供應商合作,包括Tecan,BMG,Biotek和Molecular Devices,以優(yōu)化儀器的硬件和軟件設置,以利用每種Transcreener Assays實現(xiàn)佳性能。每種Transcreener分析的技術手冊中都總結了佳的過濾器設置和儀器設置,更多的詳細信息請參見應用手冊。這樣可以確保無論您喜歡哪種熒光檢測模式或閱讀器,

 

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